RNA的提取质量直接关乎后续的实验结果。但在RNA实际提取过程中，我们经常会翻车。
比如这样
RNA降解，亮度比较均衡地衰减
（图1来源丁香园论坛，若有侵权联系删除）
再比如这样
总RNA非变性电泳显示28S不如18S亮；
图2来源琼脂糖凝胶电泳实验技巧及异常分析
或者这样
RNA凝胶电泳的加样孔有荧光
图3来源琼脂糖凝胶电泳实验技巧及异常分析
由此可见，想要提取高质量的RNA并非易事，今天小凡将从凝胶电泳的原理、实验失败常见原因、RNA提取和纯化方法（磁珠法和trizol法）这几方面阐述RNA提取的注意事项，以辅助后续实验的顺利进行。
一、凝胶电泳原理
当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。
由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等，因此根据分子大小的不同、构成或形状的差异，以及所带的净电荷的多少，便可以通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离开来。
在生理条件下，核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子状态，从这种意义上讲，DNA和RNA多核苷酸链可叫做多聚阴离子。因此，当核酸分子被放置在电场中时，它们就会向正电极的方向迁移。由于糖-磷酸骨架结构上的重复性质，相同数量的RNA几乎具有等量的净电荷，因而它们能以同样的速度向正电极方向迁移。
在一定的电场强度下，RNA分子的这种迁移速度，亦即电泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构型，分子量较小的RNA分子比分子量较大的RNA分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离RNA片段的基本原理。
判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18srRNA、28srRNA、5srRNA的三条带，且28srRNA的亮度应为18srRNA的两倍。
二、RNA实验失败主要原因及解决办法
RNA实验失败主要原因
RNA实验失败的主要原因是RNA酶的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌灯，只要存在少量的RNA酶就会引起RNA的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以建立一个无RNA酶的环境对于制备RNA很重要。
如何防止RNA酶污染？
1、RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等；
2、严格控制外源性RNA酶的污染：外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等，也可以存在于灰尘中，造成器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂的污染；
3、最大限度地抑制内源性的RNA酶，而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。
常见的RNA酶抑制剂
1、焦磷酸二乙酯（DEPC）：有高致癌性；
2、异硫氰酸胍、氯仿：有毒试剂；
3、RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin）
三、RNA提取与纯化
一直以来，完整RNA的提取和纯化，是进行RNA方面研究工作的前提，常用的提取方法包括Trizol法和磁珠法。
1、Trizol法提取RNA原理
Trizol试剂盒是一种苯酚与异硫氰酸胍（GTC）的混合物，GTC可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离。加入氯仿可抽提核酸性的苯酚，而酸性苯酚促使RNA进入水相，离心后，RNA保留在水相中，DNA和蛋白质保留在有机相中。转移水相，加入异丙醇沉淀RNA，从而得到纯化的总RNA。
整个提取过程使用有毒试剂，RNA容易降解，并且操作过程繁琐，难度大。
2、磁珠法提取RNA原理
磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大，安全无毒，不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂，对实验操作人员的伤害减少到最少，完全符合现代环保理念。并且不涉及RNA酶的处理问题，提取得到高纯度总RNA。
3、比较结果如下
四、凡知RNA相关提取试剂盒（磁珠法）
1、细胞RNA提取试剂盒
凝胶电泳结果展示
应用范围
RNA产物适用于RT-PCR、RNA-seq、NorthernBlot等实验。
产品特点
※适配高通量自动化核酸提取仪，最少人工操作时间；
※样本制备时间短，样品前处理需10min，全自动核酸提取仪50min；
※样本间差异低，结果重复性强；
※纯度高，无DNA污染；
※可处理细胞数量级范围5x10~10
2、组织RNA提取试剂盒
凝胶电泳结果展示
应用范围
纯化RNA适用于RT-PCR、RNA-Seq、芯片分析、分子克隆。
产品特性
※RNA纯度高（OD/.8-2.0）；
※高收率，无降解；
※无高分子量DNA污染（DNaseI处理）；
※适用多种样本类型；
※手工操作时间短；
关于凡知医学：
凡知医学(FireGenBiomedicals)是一家全球化运营的生物医药企业，由拥有世界顶尖药企30年从业资历的海归科学家团队创立，针对重大疾病搭建有先进的新一代核酸快速诊断试剂和仪器研发平台，创新实现了基因测序试剂盒、快速基因检测仪和检测芯片的开发，助推基因快速诊断进入基层医疗体系，致力于打造中国领先的基因快速诊断品牌，提供一体化诊断的仪器、芯片、诊断试剂和部分高端原料。
参考文献：
刘阳、杨淑霞、赖翼等.影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素[J].生物学杂志,,26(2):70-72.DOl:10./j.issn.-..02..